中國(guó)報(bào)告大廳網(wǎng)訊，在2025年的產(chǎn)業(yè)發(fā)展背景下，硫化鈉行業(yè)作為一種重要的化工原料，其應(yīng)用領(lǐng)域不斷拓展，產(chǎn)業(yè)布局也逐步優(yōu)化。除了在傳統(tǒng)化工生產(chǎn)中的應(yīng)用外，硫化鈉在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究與應(yīng)用也受到了更多關(guān)注，尤其是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備等方面的探索，為相關(guān)疾病研究提供了關(guān)鍵支持。本次研究圍繞硫化鈉在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脫毛環(huán)節(jié)的應(yīng)用展開(kāi)，旨在探究硫化鈉脫毛對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病樣皮炎小鼠模型皮膚的影響，為優(yōu)化該疾病模型造模方法提供依據(jù)，同時(shí)也為硫化鈉在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的合理應(yīng)用及產(chǎn)業(yè)布局中的細(xì)分方向研究提供參考。以下是2025年硫化鈉產(chǎn)業(yè)布局分析。
本次實(shí)驗(yàn)選用 Balb/c 小鼠，雌性，SPF 級(jí)，8 周齡，體重 18-22g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境溫度控制在 23-25℃，相對(duì)濕度 50%-60%，光暗周期 12h/12h，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物可自由攝食、進(jìn)水，實(shí)驗(yàn)經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
實(shí)驗(yàn)所用藥物及試劑包括九水硫化鈉(批號(hào)：2018010301)、法國(guó)薇婷凈純脫毛膏(溫和型，批號(hào)：C110124001)、5% 咪喹莫特乳膏(批號(hào)：H20030129)、蘇木素染液(批號(hào)：H9627)、伊紅染液(批號(hào)：YE2080)、Ki67 抗體、山羊抗兔 IgG 二抗(貨號(hào)分別為：ab16667、ab205718)。儀器方面，使用了 RM2245 轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)、DM500 光學(xué)顯微鏡、DMi8 倒置熒光顯微鏡、JT-12S 自動(dòng)組織脫水機(jī)、BMJ-A 型包埋機(jī)、RS36 型全自動(dòng)染色機(jī)、PHY-Ⅲ 型病理組織漂烘儀。
實(shí)驗(yàn)采用兩因素析因設(shè)計(jì)，因素一為干預(yù)措施(脫毛方法)，因素二為硫化鈉脫毛恢復(fù)時(shí)間。將 Balb/c 小鼠隨機(jī)分為正常組、硫化鈉組和模型組，每組再按照脫毛恢復(fù)時(shí)間(0、1、3、6d)進(jìn)一步細(xì)分為 4 個(gè)亞組，共 12 組，每組 6 只。正常組采用脫毛膏脫毛，脫毛后間隔 0、1、3、6d，在各時(shí)間節(jié)點(diǎn)分別觀察皮膚變化及病理變化，分為 C0、C1、C3、C6 亞組;硫化鈉組采用硫化鈉脫毛，脫毛后間隔 0、1、3、6d，在各時(shí)間節(jié)點(diǎn)分別觀察皮膚狀況及病理變化，分為 S0、S1、S3、S6 亞組;模型組采用硫化鈉脫毛，脫毛后間隔 0、1、3、6d 后涂抹咪喹莫特乳膏造模 6d，每天觀察小鼠銀屑病樣皮損表現(xiàn)及銀屑病面積及嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)評(píng)分，造模結(jié)束后觀察小鼠組織病理變化及小鼠表皮層 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞比例，分為 M0、M1、M3、M6 亞組。
《2025-2030年中國(guó)硫化鈉行業(yè)市場(chǎng)分析及發(fā)展前景預(yù)測(cè)報(bào)告》指出，在脫毛操作環(huán)節(jié)，先用電推剪脫光 Balb/c 小鼠背部約 2cm×3cm 毛發(fā)。硫化鈉組和模型組小鼠剃毛區(qū)域涂抹由九水硫化鈉加蒸餾水配置成的 6% 硫化鈉，用棉簽輕輕擦拭，以除去軟化的毛發(fā)，再用溫水擦拭脫毛部位，干棉球輕輕擦干;正常組小鼠用脫毛膏脫去剃毛區(qū)域毛發(fā)。
脫毛效果評(píng)估分為四個(gè)等級(jí)：優(yōu)：毛發(fā)去除干凈，皮膚狀態(tài)正常;良：有少量毛發(fā)茬殘留，部分小區(qū)域可見(jiàn)皮膚發(fā)紅;中：有明顯的毛發(fā)茬殘留，皮膚有搔抓痕及發(fā)紅區(qū);差：殘留較多的毛茬，皮膚出現(xiàn)紅腫或小切口。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，硫化鈉脫毛有效率 > 90%，硫化鈉脫毛后，硫化鈉組小鼠可見(jiàn)皮膚微紅、光滑干凈、無(wú)毛茬殘留、有細(xì)小出血點(diǎn)，且脫毛 12d 內(nèi)未見(jiàn)毛發(fā)生長(zhǎng);脫毛膏脫毛后，正常組小鼠皮膚表面干凈，無(wú)毛發(fā)殘留，但小鼠脫毛后第 3 天可見(jiàn)細(xì)小毛茬開(kāi)始生長(zhǎng)，第 6 天時(shí)可明顯觀察到新生毛發(fā)。HE 染色結(jié)果顯示，與正常組小鼠比較，硫化鈉組小鼠皮膚組織表皮結(jié)構(gòu)完整清晰，角質(zhì)層明顯，復(fù)層扁平上皮層較薄，細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)病理改變。
模型組造模操作如下：取硫化鈉脫毛小鼠 24 只，隨機(jī)分成 4 組，分別于脫毛后的第 0、1、3、6d 涂抹咪喹莫特乳膏，1 次 /d，每次 60mg，連續(xù) 6d。觀察并記錄銀屑病小鼠背部皮損變化并進(jìn)行 PASI 評(píng)分評(píng)估，主要從小鼠紅斑、鱗屑、皮膚肥厚 3 方面評(píng)價(jià)：0 分：無(wú)癥狀;1 分：輕度;2 分：中度;3 分：重度;4 分：極重度，PASI 總分為 3 個(gè)方面評(píng)分總和，總分越高表示皮損越嚴(yán)重。
正常組小鼠的皮膚平滑，顏色淺紅;模型組小鼠在連續(xù) 6d 背部皮膚涂抹 5% 咪喹莫特乳膏后均出現(xiàn)紅斑、鱗屑及皮膚肥厚的銀屑病樣皮炎癥狀。兩因素方差分析顯示，造模時(shí)間 [F (3.44,86.00)=353.8~1233，P<0.05] 與硫化鈉脫毛間隔時(shí)間 [F (4,25)=51.89~210.8，P<0.05] 均對(duì)紅斑、鱗屑、皮膚肥厚及總 PASI 評(píng)分存在顯著主效應(yīng)，且二者交互作用顯著 [F (20,125)=23.28~81.69，P<0.05]。與正常組小鼠比較，M0、M1、M3 和 M6 亞組小鼠紅斑、鱗屑、皮膚肥厚及總 PASI 評(píng)分均顯著升高(P<0.05)。第 6 天時(shí)，M0 組小鼠的紅斑 PASI 評(píng)分高于 M1、M3 和 M6 組(P<0.05);M0 組小鼠的鱗屑 PASI 評(píng)分高于 M1、M3、M6 組(P<0.05);此外，M0 組小鼠總 PASI 評(píng)分高于 M1、M3 和 M6 組(P<0.05)，M1、M3 和 M6 組紅斑、鱗屑、皮膚肥厚、總 PASI 評(píng)分比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，M3、M6 組紅斑、鱗屑、皮膚肥厚、總 PASI 評(píng)分比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
將各組小鼠脫頸處死，取背部皮膚組織樣本，固定于 10% 中性甲醛，石蠟包埋切片，HE 染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠皮損的病理改變、嚴(yán)重程度，采用 Image J 1.54 軟件測(cè)量表皮層的厚度。
HE 結(jié)果顯示，正常組小鼠皮膚組織表皮結(jié)構(gòu)完整清晰、角化層明顯、表皮層相對(duì)較薄，且炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)少。與正常組比較，M0、M1、M3 和 M6 組小鼠表皮層明顯增厚(P<0.05)，表皮層均出現(xiàn)角化不全、角化過(guò)度、棘層肥厚以及真皮層血管擴(kuò)張和充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。其中 M0 組小鼠的表皮增厚尤為明顯，與 M1、M3、M6 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，M1、M3 和 M6 組及 M3、M6 組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。M0 組小鼠皮膚組織組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)，部分小鼠表皮層角化不全較為嚴(yán)重，表皮層有局部出血，皮膚肥厚程度存在差異。
采用免疫熒光染色法檢測(cè)小鼠表皮層 Ki67 的表達(dá)，將正常組與模型組小鼠皮膚組織 OCT 包埋，冰凍切片，厚度 8μm，切片經(jīng)一抗 Ki67 抗體(1:100)4℃孵育 16h，二抗山羊抗兔 IgG(1:400)室溫孵育 1h，DAPI 染核，封片，在倒置熒光顯微鏡下拍照分析，用 Image J 1.54 軟件分別計(jì)算表皮層細(xì)胞的總數(shù)和 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，再計(jì)算 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞占表皮層細(xì)胞總數(shù)的比例。
免疫熒光結(jié)果顯示，正常組小鼠表皮中存在少量 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞;與正常組比較，M0、M1、M3 和 M6 組小鼠表皮 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞顯著增加(P<0.05);與 M1、M3、M6 組比較，M0 組表皮 Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞顯著增加(P<0.05)，M1、M3 和 M6 組及 M3、M6 組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。M0 組小鼠免疫熒光結(jié)果組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)，部分小鼠表皮層 Ki67 的數(shù)量較多。
咪喹莫特是一種 Toll 樣受體 7(TLR7)和 8(TLR8)激動(dòng)劑，通過(guò)激活角質(zhì)形成細(xì)胞和免疫細(xì)胞中的 TLR7 信號(hào)通路，誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子和趨化因子表達(dá)，導(dǎo)致表皮增厚、角化過(guò)度及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，從而形成銀屑病樣癥狀。炎癥因子的釋放與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。硫化鈉作為一種快速釋放硫化氫(H?S)的供體，其釋放的 H?S 通過(guò)多種機(jī)制損害皮膚屏障功能：一是誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，高濃度 H?S 可觸發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，顯著增加皮膚細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平，破壞抗氧化系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜與蛋白質(zhì)等生物分子損傷，此類(lèi)氧化損傷不僅破壞皮膚屏障完整性，還能活化核因子 κB(NF-κB)和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信號(hào)通路，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥因子釋放，加劇皮膚炎癥反應(yīng);二是直接細(xì)胞毒性，硫化鈉對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞具有直接毒性作用，抑制其增殖，破壞細(xì)胞黏附能力，并干擾其分化過(guò)程，導(dǎo)致角化不全與角化過(guò)度，從而損害皮膚屏障功能;三是破壞皮膚酸性微環(huán)境，硫化鈉的強(qiáng)堿性可中和皮膚表面酸性物質(zhì)，破壞其酸性屏障，影響屏障穩(wěn)定性，增加皮膚對(duì)外源性刺激的敏感性。上述機(jī)制共同作用，導(dǎo)致皮膚屏障功能顯著下降，影響皮膚的正常生理功能。
皮膚屏障功能是維持皮膚健康與生理平衡的關(guān)鍵，可有效防止病原體、過(guò)敏原等有害物質(zhì)侵入，并減少經(jīng)皮水分流失，維持皮膚水合狀態(tài)。皮膚屏障完整性對(duì)于預(yù)防干燥、炎癥及皮膚疾病至關(guān)重要，同時(shí)在免疫應(yīng)答中也發(fā)揮重要作用。前期觀察發(fā)現(xiàn)，硫化鈉脫毛劑在小鼠背部停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可導(dǎo)致嚴(yán)重皮膚損傷，故應(yīng)用硫化鈉脫毛時(shí)，必須嚴(yán)格控制作用時(shí)間，以避免皮膚損傷干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。此外，脫毛后立即進(jìn)行造模操作，可能因皮膚屏障功能未及修復(fù)而加劇炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣癥狀加重。
綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果及機(jī)制分析，硫化鈉脫毛后皮膚存在應(yīng)激狀態(tài)，即刻應(yīng)用咪喹莫特造模(M0 組)會(huì)導(dǎo)致銀屑病樣皮炎病變嚴(yán)重且個(gè)體差異顯著，影響模型均一性及后續(xù)藥物評(píng)價(jià)可靠性。為提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性、可靠性并減少對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的不良影響，建議在進(jìn)行銀屑病模型研究時(shí)，硫化鈉脫毛后待皮膚恢復(fù) 1-6d 再進(jìn)行造模，有助于促進(jìn)皮膚屏障功能恢復(fù)，減輕脫毛劑刺激，減少皮膚準(zhǔn)備階段對(duì)疾病模型建立的影響。同時(shí)，后續(xù)研究中應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚屏障功能進(jìn)行更細(xì)致評(píng)估，指標(biāo)包括但不限于經(jīng)皮水分流失量、皮膚含水量及皮膚 pH 值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，并全面理解硫化鈉脫毛對(duì)皮膚屏障功能的影響。
本次研究圍繞硫化鈉脫毛對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病樣皮炎小鼠模型的影響展開(kāi)，通過(guò)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析，明確了硫化鈉脫毛的效果及不同恢復(fù)時(shí)間對(duì)造模的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示硫化鈉脫毛有效率 > 90%，但脫毛后即刻造模會(huì)導(dǎo)致模型病變嚴(yán)重且個(gè)體差異大。從機(jī)制上分析，硫化鈉通過(guò)多種途徑損害皮膚屏障功能，進(jìn)而影響造模效果。基于此，提出硫化鈉脫毛后給予 1-6d 恢復(fù)期再造模的優(yōu)化建議，為銀屑病動(dòng)物模型的標(biāo)準(zhǔn)化制備提供了重要參考，也為硫化鈉行業(yè)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)應(yīng)用的規(guī)范化及 2025 年硫化鈉產(chǎn)業(yè)布局中相關(guān)細(xì)分領(lǐng)域的發(fā)展提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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